Teknik Veriler
Tuz giderme için kolon/plakaların kullanım talimatları c18
Ürün Tanıtımı
C18 tuzdan arındırma kolonları/plakaları, fonksiyonel grubu olan oktadeasil yüksek hidrofobisiteye ve polar olmayan bileşikler için mükemmel tutma özelliklerine sahip bir C18 silika jel matrisi ile doldurulur. C18 tuzdan arındırma kolonları/plakaları, tuz tutmadan DMT ile primer/oligo/DNA moleküllerini adsorbe edebilir ve bu da yüksek saflıkta primer/oligo/DNA ürünleriyle sonuçlanır.
Seçim Rehberi
BM Life Sciences, çeşitli boyutlarda C18 tuzdan arındırma kolonları/plakaları sunar ve primer/oligo konsantrasyonuna göre doğru tuzdan arındırma kolonunu seçebilirsiniz. Toplu işleme için 96 kuyulu tuzdan arındırma plakası seçebilirsiniz.
| Ürün Numarası | norm | Uygulanabilir oligonükleotid spesifikasyonları | Referans adımları |
| ÖZELLİK18W150 | 50mg/1mL | 10nmol - 200nmol | Adım 5 |
| ÖZELLİK18W3100 | 100mg/3mL | 10nmol - 600nmol | Adım 1 |
| ÖZELLİK18W3300 | 300mg/3mL | 10nmol - 2 .opmol | Adım 2 |
| ÖZELLİK18W61000 | 1g/6mL | 1 umol - 6 umol | Adım 3 |
| ÖZELLİK18W9630 | 30mg/96 kuyucuklu plaka | 5nmol - 100nmol | Adım 4 |
| ÖZELLİK18W9650 | 50mg/96 kuyucuklu plaka | 10nmol - 200nmol | Adım 4 |
| SPE15C18W9680 | 80mg/96-kuyulu plaka (1,5ml 96-kuyulu plaka) | 10nmol - 500nmol | Adım 5 |
| SPE23C18W9680 | 80mg/96 kuyucuklu plaka (2.3ml 96 kuyucuklu plaka) | 10nmol - 500nmol | Adım 5 |
Not
C18 Temizleme Kolonu/Plakası ayrıca HPLC ve PAGE saflaştırmasından sonra ham ürünü ve primer/oligoyu tuzdan arındırabilir, ayrıntılar için adım 5'e bakın.
Reaktif
Asetonitril Kromatografik Sınıf
0,1 M ÇAY, PH7,0
0,5 M NaCl
Yıkama solüsyonu (0,5 M Nacl'de çözülmüş %5 asetonitril)
%3 trifloroasetik asit (TFA)
Deiyonize su
%20 asetonitril
TE tamponu: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8.0
Adım 1
Örnek Hazırlama
Oligonükleotid örneğine 2 mL hacme kadar 0,5 M NacI ekleyin.
Tuz giderme sütununu etkinleştirme
Aktivasyon: Kolonu aktive etmek için 1 mL asetonitril kullanıldı.
Dengeleme: Kolonu 1 mL 0,1 M TEAA çözeltisi (PH7.0) ile dengeleyin.
Temizleme işlemi
1. 2 mL oligonükleotid içeren çözeltiyi tuzdan arındırma kolonundan geçirin.
2. Başarısız dizileri çıkarmak için kolonu 2 kez 1 mL yıkama solüsyonu ile yıkayın.
3. Tuzları uzaklaştırmak için kolonu 2 kez 1 ml deiyonize su ile yıkayın.
4. DMT'yi uzaklaştırmak için kolonu 2 kez 1 ml %3 trifloroasetik asitle yıkayın ve adsorbe edilen tabakanın turuncu-kırmızıya döndüğünü gözlemleyin; ve
5. Trifloroasetik asit ve kalan tuzları gidermek için tuz giderme kolonunu iki kez 1 mL deiyonize su ile durulayın.
6. 1 ml %20 asetonitril elüsyonu yapın ve hazırlayın.
Adım 2
Örnek Hazırlama
Oligonükleotid örneğine 4 mL hacme kadar 0,5 M NacI ekleyin.
Tuz giderme sütununu etkinleştirme
Aktivasyon: Kolonu aktive etmek için 2 mL asetonitril kullanıldı.
Dengeleme: 2 mL'lik bir kolonu 0,1 M TEAA (PH 7,0) ile dengeleyin.
Temizleme işlemi
1. 4 mL oligonükleotid içeren çözeltiyi tuzdan arındırma kolonundan geçirin.
2. Başarısız dizileri uzaklaştırmak için kolonu 2 kez 2 ml yıkama solüsyonu ile yıkayın.
3. Tuzları uzaklaştırmak için kolonu 2 kez 2 ml deiyonize su ile yıkayın ;)
4. DMT’yi uzaklaştırmak için kolonu 2 kez 2 ml %3’lük trifloroasetik asitle yıkayın, adsorpsiyon tabakası turuncu-kırmızıya dönmüştür.
5. Trifloroasetik asit ve kalan tuzları uzaklaştırmak için kolonu iki kez 2 mL deiyonize su ile yıkayın.
6. 2 ml %20'lik asetonitril elüsyonu yapın ve hazırlayın.
Adım 3
Örnek Hazırlama
Oligonükleotid örneğine 10 mL hacme kadar 0,5 M Nac ekleyin.
Tuz giderme sütununu etkinleştirme
Aktivasyon: Kolonu aktive etmek için 5 mL asetonitril kullanıldı.
Dengeleme: Kolon 10 mL 0,1 m TEAA (PH 7,0) ile dengelendi.
Temizleme işlemi
1. Oligonükleotid içeren çözeltinin 10 mL’si tuzdan arındırma kolonundan geçirildi.
2. Başarısız dizileri uzaklaştırmak için kolon iki kez 5 mL yıkama solüsyonu ile yıkandı.
3. Tuzları uzaklaştırmak için kolonu iki kez 5 mL deiyonize su ile durulayın.
4. DMT’yi uzaklaştırmak için kolonu iki kez 5 mL %3’lük trifloroasetik asitle yıkayın ve adsorpsiyon tabakasının turuncu-kırmızıya döndüğünü fark edin.
5. Trifloroasetik asit ve tuz kalıntılarını gidermek için kolonu iki kez 5 ml deiyonize su ile durulayın.
6. 5 ml %20'lik asetonitril elüsyonu yapın ve toplayın.
Adım 4
Örnek hazırlama
Oligonükleotid örneğine 0,5 mL hacme kadar 0,5 M Nacl ekleyin.
96-kuyulu plaka aktivasyonu
Aktivasyon: 96-kuyulu plakanın her bir kuyusundan 0,5 mL asetonitril geçirildi.
Denge: 96 kuyulu bir plakayı 0,5 mL 0,1 M TEAA çözeltisi (pH 7,0) ile dengeleyin.
Temizleme prosedürü
1. 96-kuyulu bir plakadan 0,5 mL oligonükleotid içeren çözelti geçirin.
2. Kötü dizileri çıkarmak için 96-kuyulu plakayı 0,5 mL yıkama solüsyonuyla 2 kez yıkayın.
3. Tuzları uzaklaştırmak için 96 kuyulu plakayı 0,5 mL deiyonize su ile 2 kez yıkayın.
4. DMT'yi uzaklaştırmak için 96-kuyulu plakayı 2 kez 0,5 ml %3 trifloroasetik asitle yıkayın ve adsorpsiyon tabakasının turuncu-kırmızıya döndüğünü gözlemleyin; ve
5. Trifloroasetik asit ve tuz kalıntılarını gidermek için 96 kuyulu plakayı iki kez 0,5 mL deiyonize su ile yıkayın.
6. 0,5 ml %20'lik asetonitril elüsyonu yapın ve materyali toplayın.
Adım 5
Örnek hazırlama
Oligonükleotid örneğine 1,2/2 mL hacme ulaşacak şekilde 0,5 M Nacl ekleyin.
96-kuyulu plaka aktivasyonu
Aktivasyon: 96-kuyulu plakanın her bir kuyusundan 1-4 ml 0,5 mL asetonitril geçirin.
Dengeleme: 96 kuyulu bir plakayı 0,5 mL 0,1 M TEAA çözeltisinin (PH 7,0) 1-4 mL'si ile dengeleyin.
Temizleme işlemi
1. 96-kuyulu bir plakadan 0,5-2 mL oligonükleotid içeren çözelti geçirin.
2. Talihsiz dizileri gidermek için 96-kuyulu plakayı 2 kez 1/2 mL yıkama solüsyonuyla yıkayın ;)
3. Tuzları gidermek için 96 kuyulu plakayı iki kez 1/2 mL deiyonize su ile yıkayın.
4. DMT’yi uzaklaştırmak için 96-kuyulu plakayı 1/2 ml %3’lük trifloroasetik asitle 2 kez yıkayın ve adsorpsiyon tabakasının turuncu-kırmızıya döndüğünü gözlemleyin;
5. Trifloroasetik asit ve tuz kalıntılarını gidermek için 96 kuyulu plakayı 2 kez 1/2 mL deiyonize su ile yıkayın.
6. 1/2 ml %20'lik asetonitril elüsyonu yapın ve materyali toplayın.
Adım 6
Reaktif
Asetonitril Kromatografik Sınıf
0,05 M ÇAY, PH 7,0
2 M ÇAY, PH 7.0
Deiyonize su (RNA moleküllerinin RNase olmadan tuzdan arındırılması ve saflaştırılması için) %60 asetonitril (%0,5 NH4OH içeren suda çözülmüş)
%20 asetonitril (koruma kaldırıldıktan sonra DNA veya RNA moleküllerini tuzdan arındırmak için)
TE tamponu: 10 mmol/L Tris-cla, 1 mmol/L EDTA, PH 8.0
Örnek Hazırlama
HPLC ile saflaştırılmış oligo: HPLC ile saflaştırılmış oligolara uygun miktarda 0,1 M TEAA ekleyin, böylece son asetonitril konsantrasyonu ≤%5 olur. Saflaştırılmış oligolar: Oligonükleotid içeren jel parçalarını 0,05 M TEAA'da çözün, jel parçalarını çıkarın, oligoyu en az 2 mL 0,1 M TEAA'da çözün.
NH4OH veya AMA'da çözünen oligolar: Kuruyana kadar buharlaştırın ve 2 mL 0,1 M TEAA'da çözün.
Tuzdan Arındırma Pompasının Etkinleştirilmesi
Aktivasyon: Kolonu aktive etmek için 1 mL asetonitril kullanıldı.
Dengeleme: 1 mL 2 M TEAA kolonunu (pH 7,0) dengeleyin.
HPLC saflaştırması için oligo tuzdan arındırma prosedürü
1. Oligonükleotid içeren çözeltiyi tuzdan arındırma kolonundan geçirin.
2. Tuzları gidermek için tuz giderme kolonunu iki kez 1 mL deiyonize su ile durulayın.
3. 1 ml %60 asetonitril kolonundan geçirilerek toplanır.
PAAG yöntemi ile saflaştırılan oligo tuz giderme prosedürü
1. Oligonükleotid içeren çözeltiyi tuzdan arındırma kolonundan geçirin.
2. Tuzları gidermek için tuz giderme kolonunu iki kez 1 mL deiyonize su ile durulayın.
3. 1 ml %60 asetonitril kolonundan geçirilerek toplanır.
Sentezden sonra DNA oligonlarının tuzdan arındırılması prosedürü
1. Oligonükleotidleri içeren çözeltiyi tuzdan arındırma kolonundan geçirin; ve
2. Başarısız dizileri çıkarmak için 1 mL 0,1 M TEAA kolonunu iki kez durulayın.
3. Tuzları gidermek için tuz giderme kolonunu iki kez 1 ml deiyonize su ile durulayın.
4. Kolonu 1 ml %20 asetonitrilden geçirip birleştirin.
Sentezden sonra RNA oligolarının tuzdan arındırılması prosedürü
1. Oligonükleotid içeren çözeltiyi tuzdan arındırma kolonundan geçirin.
2. Kolonu 2 ml 0,1 M TEAA ile yıkayın.
3. Kolonu 2 mL RNaz içermeyen su ile durulayın.
4. 2 ml %20 asetonitril (RNaz içermeyen su) bir kolondan geçirilir, elüe edilir ve toplanır. Oligonükleotid Depolama
%20'lik asetonitrilde çözülen ve 4°C'de saklanan oligonükleotidler mikroorganizmaların üremesini engeller ve kısa süreli depolamaya uygundur.
%20'lik asetonitril çözeltisindeki (veya TE gibi alkali bir tamponda çözülmüş) oligonükleotidler -20 °C kadar düşük sıcaklıklarda uzun süre saklanabilir.
Liyofilize toz formundaki oligonükleotidler uzun süre saklanabilir.
Uyarı
Kullanılan reaktif miktarları sadece tavsiye niteliğinde olup her özel durumda optimize edilmelidir.
Kullanılan reaktif miktarları sadece tavsiye niteliğinde olup, vaka bazında optimize edilmelidir.
Tuzdan arındırma kolonu, kolon/plaka üzerindeki kalıntıları elüe etmek ve kolon/tuzdan arındırma plakasının bağlama kapasitesini artırmak için yeterli aktivasyon dengesine girmelidir. Sentezlenen oligonükleotidlerin örneklemesi, CPG tozunun temizlik ve çapraz kontaminasyon için kolon/plaka içine girmesini önlemek için yavaşça yapılmalıdır.
C18 tuzdan arındırma kolonları/waferları silika matris kullanır, uygulanabilir PH aralığı 2-7'dir, PH > 7,5 silika matrisi kolayca çözer, PH
DMT'yi tuzdan arındırmak için TFA kullanırken zamana dikkat edin, çok uzun süre kullanıldığında purini uzaklaştırma etkisi olacaktır.
Bağlı Olun
B&M Universal CPG Frits Sentez Kolonları Hızlı Tuzdan Arındırma ve Arıtma Teknolojisi
B&M Universal CPG Frits Sentez Kolonları Hızlı Tuzdan Arındırma ve Arıtma Teknolojisi:
B&M Universal CPG Frits, ithal ultra yüksek molekül ağırlıklı ultra saf polietilen ve ithal CPG tozundan üretilmiş olup, özel teknoloji ile işlenerek sentez kolonunda iyi bir sentez etkisi, düşük mutasyon oranı ve güvenilir ürün kalitesine sahiptir.
Dr.Oligo/Mermade serisi sentezleyicide sentez tamamlandıktan ve amonyak çözüldükten sonra, Oligo doğrudan sentez kolonuna elüe edilebilir ve dozajlama ve boşaltma işleminden sonra, ek saflaştırma adımlarına gerek kalmadan doğrudan rutin PCR reaksiyonu için kullanılabilir, bu da kullanımı kolay, maliyet tasarrufu sağlayan ve daha hızlı teslimat sağlayan bir özelliktir!
Operasyonun özel adımları şu şekildedir:
1, Sentez B&M Evrensel CPG Fritleri sentetik kolonlar/plakalar/s 400ul, %75 asetonitril ultra saf su karışımı, sentetik artık reaktifleri gidermek için iki kez yıkandı;
2, B&M Universal CPG Frits Sentetik Amonyak Amoliz Kolonları/Plakaları, 90°C, 80PSI, Amonyak Amoliz 2-2,5 saat;
3, %100 asetonitril 400L yıkama sentetik kolon/plaka, iki kez;
4、90% Asetonitril Ultra Saf Su Karışımı 400ul Sentetik Kolon/Plakayı İki Kez Yıkama, Pompalama ile Kuru;
5、Sentetik kolon/plaka üzerinde primerlerin elüsyonu için uygun eluant hacmi, eluant ultra saf su olabilir, %3 trietilamin ultra saf su karışımı olabilir, ayrıca yaklaşık %20 asetonitril ultra saf su karışımı olabilir.
6、 Elüsyon solüsyonu ölçülebilir, dağıtılabilir, boşaltılabilir, paketlenebilir ve sevk edilebilir.